OBTENÇÃO DE RNA DE BICHO-MINEIRO (Leucoptera coffeella) PARA TRANSCRITÔMICA E SILENCIAMENTO GÊNICO

Resumo

O Brasil é o maior produtor de café do mundo, com uma produção de aproximadamente 59 mil toneladas em 2018 gerando uma receita aproximada de 22 bilhões de reais. Para garantir uma alta produtividade, a cultura exige adubação e manejo fitossanitário adequado. Dentre as principais pragas que afetam a cultura está o bicho-mineiro do cafeeiro Leucoptera coffeella (Lepidoptera: Lyonetiidae), que em alto níveis de infestação pode causar até 100% de desfolha e queda de até 72% de produtividade. Considerando-se a dificuldade em fontes de resistência para melhoramento genético do cafeeiro para a praga em foco e as limitações na eficiência e durabilidade dos tratamentos químicos e de controle biológico, um método alternativo promissor de controle como o silenciamento gênico por RNA interferente (RNAi) pode ser desenvolvido. As sequências de genômica e a transcritômica de L. coffeella necessárias para a seleção de genes-alvo do RNAi ainda são desconhecidas. Visando o sequenciamento do transcritoma de L. coffeella, o presente trabalho objetivou o estabelecimento de protocolos para a obtenção de insetos em diferentes fases do desenvolvimento e a respectiva extração do RNA das amostras, tendo em vista o fato de não haver referências de extração do transcritoma da praga na literatura. Foram realizadas em laboratório a coleta de ovos, larvas recém eclodidas, larvas em alimentação, pupas e adultos, para extração do RNA. Obtivemos material suficiente dos insetos para proceder à extração de RNAs das fases de larva, pupa e adultos. O resultado em duplicata da extração de RNA total da fase adulta indica que o protocolo foi estabelecido com sucesso, pois obtivemos a quantidade necessária para o sequenciamento (mínimo de 10 µg). O estudo da expressão gênica do inseto permitirá maior conhecimento de suas características para a criação de estratégias de controle desta praga nas lavouras cafeeiras do país.